一、抗体选择的核心要素

1. 实验类型与应用验证

   • 实验类型：不同实验对抗体特性要求不同。例如，WB需要识别线性表位（变性蛋白）的抗体，而IF/IHC需要识别天然构象的抗体。

   • 验证信息：优先选择说明书明确标注适用实验类型的抗体（如WB、IHC、IF）。未标注的抗体可能未经验证，需谨慎使用。

2. 样本种属与交叉反应

   • 匹配种属：确保抗体反应种属（Reactivity）包含样本种属（如人、小鼠）。若未列出，可通过蛋白同源性（如NCBI BLAST）预测交叉反应，同源性>90%时可尝试。

   • 避免同源宿主：若样本为小鼠，一抗应避免选择小鼠或大鼠来源（如兔源抗体更优），以减少二抗与内源性IgG的交叉反应。

3. 抗体宿主与二抗匹配

   • 一抗宿主：根据样本选择不同种属的一抗宿主（如兔、山羊），确保二抗可特异性识别一抗的Fc段。

   • 二抗选择：二抗需匹配一抗的宿主（如兔源一抗选抗兔二抗），并根据实验方法选择标记（HRP用于WB，荧光染料用于IF）。

4. 抗体类型与特性

   • 单克隆 vs 多克隆：单抗特异性高但亲和力可能较低，多抗亲和力强但易产生背景。优先选择已验证的单抗或高纯度多抗。

   • 免疫原设计：若检测蛋白片段或特定结构域，需选择针对该区域的抗体（如胞外域抗体用于流式检测活细胞表面蛋白）。

二、特殊实验场景的注意事项

1. 免疫组化（IHC）

   • 样本处理：确认抗体是否适用于甲醛固定石蜡包埋（FFPE）或冰冻切片。部分抗体需抗原修复步骤。

   • 品牌选择：如澳睿赛生物的IHC抗体兼容多种染色方法（酶染/荧光）。

2. 多色实验与背景控制

   • 交叉吸附二抗：在含内源性IgG的样本（如脾脏）或多色实验中，使用预吸附二抗以减少非特异性结合。

   • Fab片段二抗：用于封闭内源性IgG或双染实验（单价片段避免交叉反应）。

3. 稀有种属样本

   • 同源性分析：若样本种属（如猪、牛）无已验证抗体，需通过免疫原序列比对同源性，或联系厂家（如澳睿赛生物）进行序列分析。

三、抗体验证与优化策略

1. 文献与说明书参考

   • 优先选择文献引用多或说明书提供清晰结果图的抗体。

   • 关注品牌“王牌产品线”。

2. 免费样品测试

   • 部分品牌提供免费小样，可在购买前验证抗体适用性。

3. 性价比与规格选择

   • 计算单次使用成本（如抗体稀释比例与总使用次数），优先选择小包装以降低浪费。

四、常见问题与解决方案

五、保存与使用建议

• 保存条件：长期保存于-20°C，避免反复冻融（推荐分装）；含甘油抗体可-20°C保存。

• 稀释与孵育：按说明书推荐浓度梯度优化，避免过量抗体导致高背景。